应用DNA barcoding 对蓝靛果品种鉴定的初步鉴定
目 录
1. 引言 3
1.1 蓝靛果的形态特性 3
1.2蓝靛果的生态习性 3
1.3蓝靛果的应用价值 4
1.3.1食用价值 4
1.3.2药用价值 4
1.3.3经济价值 4
1.4蓝靛果分类学研究概况 4
1.5 DNA条形码概念 5
1.6 DNA条形码技术的原理 6
1.7 DNA条形码的技术特点 6
1.8 DNA条形码的应用 7
1.8.1 DNA条形编码在动物分类中的应用 7
1.8.2 DNA条形码在植物中的研究现状 7
1.9研究的意义、研究内容、预期目标 10
1.9.1研究的意义 10
1.9.2主要研究内容 10
1.9.3 本课题研究的预期成果 10
2 材料与方法 11
2.1 主要技术路线 11
2.2 实验材料 12
2.3 主要试剂 12
2.4 主要仪器 12
2.5 所用溶液及配制 12
2.6实验方法 13
2.6.1基因组总DNA提取 13
2.6.2 DNA条形码序列的PCR扩增 13
2.6.3 PCR产物的电泳检测 15
2.6.4 PCR产物纯化回收 15
2.6.5 PGM-T克隆 16
2.6.6 感受态细胞的制备 16
2.6.7 转化 17
2.6.8 菌落PCR筛选阳性克隆 17
2.6.9 DNA序列测序样品 18
2.6.10 条形码序列的生物信息学分析 18
3.结果与讨论 19
3.1 样品来源 19
3.2条形码序列的PCR扩增 19
3.2.1 条形码matk的扩增 19
3.2.2 条形码rpoc的扩增 20
3.2.3 条形码rbcl的扩增 20
3.2.4 条形码ycf的扩增 20
3.2.5 条形码ITS的扩增 21
3.2.6 条形码ITS2的扩增 21
3.2.7 条形码psbA-trnH的扩增 21
3.2.8 补充的PCR扩增反应 22
3.3 DNA纯化回收 22
3.3.1 matk的DNA纯化回收 22
3.3.2 rpoc的DNA纯化回收 23
3.3.3 rbcL的DNA纯化回收 23
3.3.4 ycf的DNA纯化回收 23
3.3.5 psbA-trnH 的DNA纯化回收 23
3.3.6 ITS2 的DNA纯化回收 23
3.4 T-A连接 24
3.5 转化 24
3.6 阳性克隆筛选 24
3.7阳性克隆的PCR鉴定 25
3.7.1 条形码matk样品的PCR鉴定 25
3.7.2 条形码rpoc的PCR鉴定 25
3.7.3 条形码rbcL的PCR鉴定 25
3.7.4 条形码ycf的PCR鉴定 26
3.7.5 条形码ITS2的PCR鉴定 26
3.7.6 条形码psbA-trnH的PCR鉴定 26
3.8不同来源蓝靛果的DNA BARCODING分析 26
3.8.1 DNA条形码matk分析结果 26
3.8.2 DNA条形码rpoc分析结果 28
3.8.3 DNA条形码rbcL分析结果 29
3.8.4 DNA条形码 ycf分析结果 30
3.8.5 DNA条形码 psbA-trnH分析结果 31
3.8.6 DNA条形码ITS2分析结果 32
4. 结论： 34
参考文献： 34
摘 要 37
关键词 37
ABSTRACT 38
Key words 38
致 谢 39
附图 40
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