聚羟基烷酸脂基因双元表达载体的构建为了获得目的基因能够在真菌菌丝体中高效表达的载体，本实验以质粒pMD18Thyg质粒为基础构建聚羟基烷酸脂基因的高效表达载体。将pMD18Thyg质粒用SpeⅠ进行酶切，然后经过凝胶回收得到基因片段。JB13质粒和J211质粒分别用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后用T4连接酶连接后得重组质粒pJB-211，再用pJB-211用pJBSpeI和RTrpc行PCR扩增，扩增产物用SpeⅠ进行酶切，并经过凝胶回收得到大约2000bp的片段。用T4连接酶将这两个片段进行连接，并通过化学转化的方法导入大肠杆菌E.coli DH5α，通过PCR扩增、酶切和测序来筛选和鉴定阳性转化子，最后成功获得了含有pMD18Thyg质粒的大肠杆菌菌株。
关键词：PHA；表达载体；连接转化；PCR
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