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蚯蚓抗菌肽的提取、纯化及抗菌效果初步探讨


全文字数:9000字左右  原创时间:<=2022年

【内容摘要】

本论文以鲜活蚯蚓为主要原料,通过对蚯蚓组织匀浆,主要利用硫酸铵沉淀法获取组织蛋白。随后,对提取物用葡聚糖G-100进行分离提纯,获得具有抗菌活性的抗菌肽。并用抗菌肽粗品,通过对其生物活性的探讨,明确蚯蚓抗菌肽对细菌、真菌的初步作用特点。在花溪区购买的太平二号蚯蚓,清洗干净。用生理盐水浸泡36h,直到蚯蚓吐净体内的污泥。将浸泡过的蚯蚓用0.05mol/l的磷酸缓冲溶液(ph=6.70)冲洗,并使用高速组织匀浆机匀浆,4°C冷冻离心。应用硫酸铵沉淀法对蚯蚓体内蛋白进行粗提取。获得的蛋白粗品通过葡聚糖G-100凝胶分离纯化,以ph=6.70的磷酸缓冲液为洗脱液,获得1.11mg/ml的蚯蚓抗菌肽粗品。用纸片法对提取的抗菌肽粗品进行体外抗菌活性检测,检测结果表明:匀浆法提取的蚯蚓抗菌肽粗品抗菌活较弱,对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌、都柏林沙门氏菌均有抗菌效果,但是对真菌如根霉、黄曲霉、青霉无明显效果。通过最小二倍稀释法测定最小抑菌浓度(MIC),得到结果为:对金黄色葡萄球菌的MIC为0.14mg/ml;对鸡大肠杆菌的MIC为0.56mg/ml;对都柏林沙门氏菌的MIC为0.28mg/ml。而其对于青霉、曲霉、根霉的抑菌效果很弱,所以在提取物的抗菌肽浓度下没有抑制细菌的生长。以上研究结果可以为解决抗生素滥用问题提供用天然抗生素替代的依据,并且可以为蚯蚓作为特种经济动物的养殖与开发利用探讨路径。
关键词: 蚯蚓,抗菌肽,硫酸铵沉淀, G-100,抗菌效果

 

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